Soutenance de thèse de Dylan Jabeguero le 30 juin 2022

Resumé:
« Les glycosyltransférases (GT) sont des enzymes capables de glycosyler un large éventail de molécules. Pour cette raison, elles sont largement utilisées dans le développement de molécules thérapeutiques. Dans ce projet de thèse, nous avons exploré le potentiel des GTs comme outils pour la glycobiologie synthétique, en nous concentrant sur leur capacité à glycosyler des membranes synthétiques. Ce projet est divisé en deux parties. La première partie porte sur l’étude de la spécificité vis-à-vis du nucléotide sucre donneur et du mécanisme catalytique d’une GT modèle qui fonctionne sur une membrane lipidique, la MGD1 d’Arabidopsis thaliana. MGD1 est une galactosyltransférase qui transfère un galactose de l’UDP-Gal au diacylglycérol (DAG), et qui a besoin de lipides anioniques tels que le phosphatidylglycérol (PG) ou l’acide phosphatidique (PA) pour son activité. Nous avons utilisé une approche basée sur l’analyse de séquences et de structures de GT pour obtenir un mutant MGD1 pouvant utiliser l’UDP-glucose. Par des études de mutagenèse dirigée, nous avons cherché à consolider l’hypothèse d’une dyade catalytique PG-His chez MGD1 et à identifier le ou les sites de liaison de l’enzyme au PA. Dans la deuxième partie du projet, nous avons testé la capacité de la LgtC, une galactosyltransférase bactérienne, à synthétiser l’antigène Gb3 sur des systèmes membranaires synthétiques. La capacité de la LgtC à générer du Gb3 sur des vésicules unilamellaires géantes (GUVs) a été démontrée par microscopie confocale en utilisant une lectine spécifique du Gb3, la sous-unité B de la Shiga-toxine (StxB) marquée par fluorescence. L’utilisation de la microbalance à cristal de quartz avec mesure de dissipation (QCM-D) a permis une évaluation quantitative du Gb3 formé sur une bicouche lipidique supportée (SLB). Le potentiel de LgtC et MGD1 à transférer un galactose fonctionnalisé (Gal-N3) à leurs accepteurs respectifs a également été évalué. Les connaissances acquises dans le cadre de cette recherche ont des retombées pour des applications potentielles des GTs en glycobiologie synthétique »