Chromatographie

Le Plateau de Chromatographie et d’ANalyses de Sucres (PCANS) est constitué de personnels techniques experts dans les domaines de la caractérisation et de l’analyse structurale de glycanes sous toutes leurs formes et d’origines diverses (végétales, algales, fongiques, bactériennes, de synthèses …).

Ce plateau est sous la responsabilité de Laurine BUON, Ingénieure d’Etudes (CNRS). Ce plateau est constitué de douze systèmes de chromatographie liquides ou gazeux.

Son personnel comprend trois personnes, Eric Bayma, Assistant Ingénieur, spécialiste en analyses de poids moléculaires par Chromatographie liquide HPSEC-MALS/UV/RI, et responsable de la maintenance des équipements, Paul Charpiot, Assistant Ingénieur, spécialisé en analyse de composition osidique par Chromatographie en phase gazeuse, et Laurine Buon, Ingénieure d’Etude, spécialisée dans l’analyse structurale et la purification de mono-oligo et polysaccharides par différentes méthodes de chromatographie en phase liquide, ionique et gazeuse.

Chromato

Ses missions

Le plateau PCANS (Plateau de Chromatographie et d’ANalyses de Sucres), est un support technique et méthodologique aux 5 équipes du CERMAV, dédié à la caractérisation, à l’analyse structurale et à la purification des glycanes. Le plateau peut également être sollicité dans le cadre de prestations de service (sous forme de prestations ponctuelles ou de contrats de prestations) par des industriels, divers laboratoires de recherches publiques (CNRS, Universités, INRA, INSERM, …), ou d’autres entités nécessitant l’expertise de celui-ci (Hôpitaux, laboratoires privés …).

Exemples d’analyses proposées dans le cadre des prestations

-Dosage colorimétrique des sucres totaux (méthode de Dubois);
-Dosage colorimétrique des protéines (méthode de Bradford);
-Dosage colorimétrique des sulfates (méthode à l’Azure A);
-Analyse qualitative et quantitative des monosaccharides par chromatographie ionique couplée à un détecteur par ampérométrie pulsée (HPAEC/PAD), ou par chromatographie liquide haute performance couplée à un réfractomètre (HPLC/RI);
-Analyse qualitative et quantitative des monosaccharides constitutifs des oligo et polysaccharides, après dérivation chimique, par chromatographie en phase gazeuse (GC/FID);
-Détermination des liaisons osidiques des oligo et polysaccharides, après dérivation chimique, par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC/MS);
-Détermination des poids moléculaires et de l’indice de polydispersité par chromatographie d’exclusion stérique couplée à une triple détection, UV-Visible, diffusion de lumière multiangles et réfractométrie (HPSEC/UV-MALS-RI);
-Séparation de composés par chromatographie liquide haute performance couplée à différents détecteurs, réfractométrie, UV-Visible ou détecteur évaporatif à diffusion de lumière (RI-UV ou DEDL);
-Fractionnement et purification de composés par chromatographie d’exclusion stérique couplée à un réfractomètre (SEC/RI);
-Dessalage et/ou Ultrafiltration d’oligo et polysaccharides.

Ses équipements

Pour mener à bien ses missions, PCANS dispose d’un panel d’équipements de chromatographies en phase liquide et gazeuse:

 

  • Chromatographie en phase liquide (10 Equipements )

3 Chromatographes liquides ultra hautes pressions (Ultimate 3000 -ThermoFisher),couplés à différents types de détecteurs (UV/Visible, Réfractomètre, Détecteur évaporatif à diffusion de lumière) et équipés de différents types de colonnes analytiques ou semi-preparatives, en phase normales, inverses, greffées et gels filtration. (Figure 1)

2 Chromatographes ioniques (Dionex ICS3000 et ICS6000 – ThermoFisher), couplés à un détecteur ampérométrique pulsé (HPAEC-PAD) ou électrochimique (HPAEC-EC), et équipés de différents types de colonnes analytiques (CarboPac et IonPac). (Figures 2 et 3)

1 Chromatographe liquide ultra haute pression (UHPLC – Shimadzu), couplés à trois détecteurs (UV, Détecteur à diffusion de lumière 3 angles et Réfractomètre), et équipé de différentes colonnes analytiques gel filtration (TSK gel et Shodex OH Pak). (Figure 4)

4 Systèmes de chromatographie à basses pression dédiés à la purification, couplés à un réfractomètre et équipés de différents types de colonnes gel filtration (gel HW40, Biogel, Superdex, Sephadex) (Figure 5)

 

  • Chromatographie en phase gazeuse (2 Equipements):

2 Chromatographes en phase gazeuse (GC6850 – Agilent) couplés à un détecteur à ionisation de flamme (GC-FID) ou à un spectromètre de masse simple quadripôle (GC-MS) (Figure 6)    

Modalités d’utilisation et conditions d’accès au plateau

Le plateau de chromatographie est ouvert à la communauté scientifique publique et privée, dans la limite de son expertise, de ses champs d’application et de ses ressources humaines et techniques. Les services proposés sont détaillés dans le paragraphe «  Type d’analyses proposées dans le cadre des prestations »

Les demandes ou interactions, peuvent être réalisées sous forme de prestations ponctuelles, de contrat de prestations, de contrat de recherche ou de collaborations, selon le contexte et les objectifs.

 

 

  Mode de fonctionnement

Toute demande fait l’objet d’un échange préalable avec les membres du plateau, soit par téléphone (04.76.03.76.78), soit par mail En fonction de la complexité de la demande, une réunion peut être envisagée.

Un exemple de processus du traitement des demandes est proposé dans le schéma ci-dessous.

Personnels du plateau

Eric BAYMA

Eric BAYMA est Assistant Ingénieur. Il est spécialiste en analyses de poids moléculaires par chromatographie liquide HPSEC/UV-MALS-RI, et responsable de la maintenance des équipements.

Laurine BUON est Ingénieure d’Etude. Responsable du plateau, elle est spécialisée dans l’analyse structurale et la purification de mono-oligo et polysaccharides par différentes méthodes de chromatographie en phase liquide, ionique et gazeuse.

Paul CHARPIOT est Assistant Ingénieur. Il est spécialisé en analyse de composition osidique par chromatographie en phase gazeuse et par chromatographie ionique.

Voir aussi dans «Plateaux Techniques»

Calcul scientifique Le CERMAV dispose de moyens de calcul propres au laboratoire et divers logiciels de modélisation moléculaire (Material Studio, Schrodinger...). Il bénéficie également des moyens informatiques du Centre d'Expérimentation et de Calcul Intensif en Chimie (PCECIC) qui représente le plateau de chimie, modélisation et informatique de la plateforme PCN-ICMG. Caractérisation de matériaux Le plateau technique dispose des équipements permettant de mettre en œuvre des matériaux (nano)composites et d'en assurer la caractérisation mécanique et thermique. L'équipe de recherche responsable du plateau technique possède également des compétences particulières dans le domaine des charges et polymères biorenouvelables (microfibrilles et whiskers de cellulose, amidon thermoplastique, protéines...). Contacts : Laurent Heux, Sonia Boisseau, responsables scientifiques, 04 76 03 76 03 Pierre Sailler, responsable technique, 04 76 03 76 11 Diffusion de rayonnement Au sein de l'équipe "physicochimie des glycopolymères" dirigée par le Dr Redouane Borsali, et dans le cadre des approches de caractérisation structurale multi-échelle du Cermav sur les glycomatériaux, nous développons des techniques de diffusion de rayonnement Ces techniques permettent, entre autres, de caractériser des auto-assemblages nano-organisés (particules, micelles, vésicules, films...) à base de glycopolymères. Ces différents systèmes trouvent leur intérêt dans divers domaines applicatifs : reconnaissance moléculaire, nanoparticules fonctionnalisées et glycofilms pour les technologies du futur (nanoélectronique, nanobiosciences...). Contact : Dr Christophe Travelet, ingénieur d'études, 04 76 03 76 90